國家印發(fā)新冠病毒核酸篩查稀釋混樣檢測技術(shù)指引

一、適用對象

新型冠狀病毒核酸篩查稀釋混樣技術(shù)（以下簡稱稀釋混樣）僅適用于大人群樣本的篩查，稀釋混樣檢測結(jié)果不作為最終確診依據(jù)。在人群總體陽性率較低（低于0.1%）時更為適宜。以下人群不建議采用稀釋混樣檢測：

（一）重點區(qū)域人群（近期有疫情發(fā)生的小區(qū)含確診病例和無癥狀感染者、老舊小區(qū)、人口密集小區(qū)、流動人口聚集區(qū)和近期離省外出人群）、其他不適合稀釋混樣檢測的人群；

（二）醫(yī)療機構(gòu)就診患者。

二、實驗室條件

（一）根據(jù)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務(wù)院424號令），具備在設(shè)區(qū)的市級人民政府衛(wèi)生健康主管部門備案的生物安全二級及以上實驗室。

（二）根據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號），具備經(jīng)過省級衛(wèi)生健康行政部門審核備案的臨床基因擴增檢驗實驗室。

（三）醫(yī)學(xué)檢驗實驗室（常稱為第三方實驗室）應(yīng)當(dāng)符合《醫(yī)學(xué)檢驗實驗室基本標(biāo)準(zhǔn)（試行）》《醫(yī)學(xué)檢驗實驗室管理規(guī)范（試行）》等要求。

三、生物安全要求

根據(jù)《國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測有關(guān)要求的通知》（國衛(wèi)辦醫(yī)函〔2020〕53號）和《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）》的有關(guān)要求，采樣和實驗室檢測人員應(yīng)采用生物安全三級實驗室級別的個人防護。檢測工作完成后，廢棄物嚴(yán)格按照文件要求處理，不得保存樣本。

四、操作流程

（一）材料準(zhǔn)備。

1.采樣管。常規(guī)采樣管，推薦含病毒保存液1～2ml的標(biāo)準(zhǔn)采樣管。

2.咽拭子。

3.振蕩器。

4.其他開展核酸檢測的常規(guī)物質(zhì)準(zhǔn)備。

（二）采樣與混合。

1.咽拭子采樣方法。被采集人員頭部微仰，采樣者將拭子越過舌根，在被采集者兩側(cè)咽扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，將拭子頭浸入含1～3ml病毒保存液（也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。

2.樣本混合。將采集的數(shù)個樣本（原則上不超過5個）各取200ul進行充分混合，形成混合待檢樣本。

（三）核酸檢測。

核酸提取與檢測過程按有關(guān)實驗室常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)操作流程進行。每一次上樣擴增中，80個加樣孔用于加入混合樣本（如5混1，總計80×5個單樣本）；10個加樣孔用于單樣本（單樣本來自上述80×5個原液的隨機樣本）。

（四）陽性結(jié)果判斷與重測。

1.檢測結(jié)果先按照各檢測試劑盒使用說明書的要求，對被檢測基因位點逐一判定，出現(xiàn)任一位點陽性或能測出Ct值的混合樣本，均作為重測對象。

2.混合樣本檢出Ct值，其所有的單個原液樣本需重新取樣，按照常規(guī)方法進行單樣本核酸檢測。

3.單樣本檢出陽性，其所在混合樣本要全部按常規(guī)方法進行單樣本核酸檢測。

五、質(zhì)量控制

（一）室內(nèi)質(zhì)控。每批上樣檢測應(yīng)當(dāng)在剩余加樣孔中設(shè)置1個弱陽性質(zhì)控樣本和三個陰性質(zhì)控樣本（2份生理鹽水和1份陰性混合樣本）。3份陰性質(zhì)控樣本隨機放在臨床樣本中間。弱陽性質(zhì)控測定為陽性，3個陰性質(zhì)控全部測定為陰性，視為在控。反之，則為失控，不可發(fā)出報告，應(yīng)分析原因，必要時重新檢測樣本。

（二）室間質(zhì)評。實驗室應(yīng)參加省級及以上臨床檢驗中心組織的室間質(zhì)量評價（EQA）活動，按照活動要求完成質(zhì)評物接收、儲存、檢測和回報檢測結(jié)果等工作。

六、注意事項

（一）注意避免采樣過程中的交叉污染，落實一人一消毒；混樣室在每進行一批樣本稀釋混樣操作后，應(yīng)進行消毒處理。

（二）拭子應(yīng)完全浸潤在病毒保存液中，樣本在混合前后充分震蕩（在振蕩器上振蕩30秒）。

（三）稀釋混樣檢測必須提取核酸，禁用“一步法”。

（四）建議對試劑檢測靈敏度進行評估，應(yīng)選擇靈敏度較高的檢測試劑。

（五）稀釋混樣檢測的陰性樣本按每批次擴增留取一份陰性樣本備查。