本品系用百日咳第Ⅰ相菌種經培育后取菌體制成懸液，加適當殺菌劑，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋制成，每ml含菌45億～90億。用于制備百日咳菌苗、白喉、破傷風類毒素混合制劑。

　　1菌種

　　1.1制造百日咳菌苗之菌種、檢定用的Ⅰ相診斷血清、百日咳分型血清及百日咳參考菌苗，由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經同意。

　　1.2菌種檢定

　　1.2.1培養(yǎng)特性

　　于包-姜（Bordet-Gengou）氏或其他適宜的培養(yǎng)基上培育，各菌株應具有典型的形態(tài)及生化特性。

　　1.2.2血清學特性

　　將35～37℃培育40～48小時的菌苔，混懸于生理鹽水或磷酸鹽緩沖生理鹽水內，使每ml含菌20億個，與Ⅰ相血清做定量凝集反應，凝集效價應達到血清原效價之半。同時與單價分型血清做定量凝集反應，其型別應與該菌種標定型別相同。

　　1.2.3皮膚壞死試驗

　　用健康家兔或豚鼠至少2只，用培育40～48小時的菌苔混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內，然后稀釋為幾個不同濃度的菌液，分別用每一稀釋度的菌液注射于家兔或豚鼠的皮內0.1ml，經72小時觀察反應。如2只家兔或豚鼠中有1只注射0.4億個菌以下的菌液部位出現(xiàn)出血性壞死者為陽性反應，判為合格。

　　1.2.4毒力試驗

　　用體重16～18g之小白鼠至少3組，每組至少10只，在麻醉狀態(tài)下從鼻腔滴入經培育40～48小時，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋的菌液0.05ml觀察14天，記錄小白鼠生死情況，按ReedMuench法計算LD50，LD50菌數(shù)不超過1.2億判為合格。

　　1.2.5免疫力試驗

　　1.2.5.1方法

　　按附錄2《百日咳菌苗原液免疫力試驗方法》進行。

　　1.2.5.2判定

　　試驗菌液每個接種劑量的免疫效價應不少于4.0IU.若試驗菌液的效價低于此要求時，可復試，其結果的幾何平均值（如用概率分析法時，應用加權幾何平均值）≥4.0IU，仍判為合格。

　　1.3菌種保存

　　1.3.1菌種應用凍干法保存。

　　1.3.2凍干菌種應保存在2～8℃。凍干后抽樣按1.2項進行檢查，合格的菌種可使用2年，以后每年檢查1次，如仍合格可繼續(xù)使用1年。

　　2.制造

　　2.1制造百日咳菌苗原液至少應選用2個菌株，制成的菌苗應含1、2、3型因子。

　　2.2制造百日咳菌苗原液用活性炭半綜合培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基。如用液體培養(yǎng)基，不得含有已知引起人體毒性或變態(tài)反應的成分。

　　2.3原液制造

　　2.3.1菌種

　　凍干菌種啟開后接種于改良包-姜氏或活性炭半綜合培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基上。于35～37℃培育不超過72小時，以后各代不超過48小時，傳代菌種保存不得超過14天，凍干菌種啟開后用于生產時不應超過10代。

　　2.3.2培育

　　可用固體法或液體法培育。培育時間不得超過48小時，經檢查為純菌后，用適當方法收集菌體，混懸于pH值為7.0～7.4的磷酸鹽緩沖生理鹽水中。

　　2.3.3殺菌

　　原液可用不超過0.1%（ml/ml）甲醛溶液殺菌，放37℃2～3天。亦可用其他適宜的殺菌劑和殺菌方法殺菌。

　　2.3.4純菌試驗

　　原液應逐瓶（罐）抽樣接種普通瓊脂斜面及普通血液瓊脂斜面（或活性炭半綜合培養(yǎng)基）各1管，放35～37℃培育2天，然后放24～26℃1天。有雜菌生長者應廢棄。

　　2.3.5原液合并

　　固體法工藝生產經純菌試驗合格的原液應進行合并。不同菌株不同日期制造2的原液應分別合并。合并后，可加適量防腐劑，并保存于2～8℃。

　　2.4原液檢定

　　2.4.1濃度測定

　　每瓶原液應按中國細菌濁度標準與質量檢定部門會同測定濃度。稀釋菌苗時即按此濃度計算。

　　2.4.2鏡檢

　　每瓶原液取樣稀釋至成品濃度，涂片染色鏡檢，應為革蘭氏陰性球桿菌。至少觀察10個視野，應無雜菌。

　　2.4.3凝集反應

　　每瓶原液按1.2.2項與Ⅰ相血清做定量凝集試驗，其凝集效價應達血清原效價之半，如僅達到或低于血清原效價1/4時，應作免疫力試驗，合格后方可使用；同時應用單價分型血清做定性凝集試驗，其所含型別應與制造原液的菌種型別相同。

　　2.4.4無菌試驗

　　每瓶原液除按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行無菌試驗外，并做特異無菌試驗。如特異無菌試驗有百日咳菌生長，可復試一次，若仍有百日咳菌生長，原液應判為不合格。

　　2.4.5毒性試驗

　　2.4.5.1方法

　　按附錄3《百日咳菌苗原液毒性試驗方法》進行醫(yī)學|教育網搜集整理。

　　2.4.5.2判定

　　試驗組小白鼠注射后72小時的總體重不少于注射前總體重，第7天小白鼠增加的體重不少于對照組增加體重的60%，并不得有死亡，該批原液毒性試驗判為合格。

　　試驗結果達不到上述要求，可復試一次。仍達到不過要求，可將原液放置1.2.5項方法及要求進行。

　　2.5原液保存

　　應保存于2～8℃。原液自采集之日起至成品發(fā)出不得少于4個月。原液自采集之日起效期為3年。