1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復，可在此步后進行

　　2.緩沖液洗3min/2次。

　　3.為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分鐘。

　　4.緩沖液洗5min/2次醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理。

　　5.滴加UltraVBlock，在室溫下孵育5分鐘以封閉非特異性的背景染色。

　?。ㄗⅲ悍跤灰^10分鐘，否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有5－10%正常羊血清，這一步可以省略。）

　　6.緩沖液洗5min/2次。

　　7.滴加一抗工作液37℃孵育1－2小時。（具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定）

　　8.緩沖液洗5min/2次。

　　9.滴加Primary Antibody Enhancer（增強子），在室溫下孵育20分鐘。

　　10.緩沖液洗5min/2次。

　　11.滴加HRPPolymer（酶標二抗），在室溫下孵育30分鐘。

　　（注：HRPPolymer對光敏感，應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。）

　　12.緩沖液洗5min/2次。

　　13.向1mlDAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromogen，混勻后滴加到切片上，孵育3－15分鐘。（具體時間由染色深淺決定。） 14.自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。