醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編搜集了有關(guān)2014主管藥師考試復(fù)習(xí)之生理學(xué)的復(fù)習(xí)知識(shí)點(diǎn)，整理如下：

（1）免疫透射比濁法：

①樣品稀釋劑：pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸鹽中含0.15mol/L氯化鈉），內(nèi)含PEG-6000 40g/L及表面活性劑適量（選用聚氧乙烯月桂醚類，如Thesit或Tween-20），用GS玻芯漏斗抽濾后用。本試劑的吸光度A340nm＜0.05，在2～6℃冰箱中可存放半年。如半年后A值仍＜0.05，可繼續(xù)應(yīng)用，如＞0.05可按上述條件抽濾后再用。

②羊或兔抗人apoAⅠ抗血清：原血清效價(jià)以1∶32～1∶64為宜?？寡蹇捎煤琍EG-6000的磷酸鹽緩沖液（不含表面活性劑）或用硫酸銨沉淀法純化?？寡鍛?yīng)用液濃度因各批抗血清的效價(jià)及免疫親和力而異（應(yīng)按試劑盒說明書，臨用前稀釋）?？寡逯泻栏瘎?～6℃冰箱中可存放半年。原血清（凍干）在低溫冰箱中（－20℃以下）可貯存數(shù)年。

③參考血清：現(xiàn)在已有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，即WHO CM參考物質(zhì)SPI-01（凍干血清）。符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)血清由衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學(xué)研究所提供。

校準(zhǔn)血清保存在－20℃以下，至少穩(wěn)定半年，化凍后必須徹底混勻后才能應(yīng)用。最好備有高、中、低濃度（例如apoAⅠ 2.0，1.3與0.6g/L左右）的校準(zhǔn)血清各1份。便于作校準(zhǔn)曲線。

附注：

①關(guān)于抗血清：比濁測(cè)定與其他方法相比對(duì)抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜?？寡逯斜仨毑缓s抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達(dá)到免疫純、色譜純與電泳純，這不是一般實(shí)驗(yàn)室都能做到的。抗血清效價(jià)（滴度）不可低于16.目前國(guó)內(nèi)某些商品試劑中，apoA-Ⅰ抗血清效價(jià)極低，選購(gòu)試劑盒時(shí)必須注意。如果沒有在選購(gòu)前鑒定抗血清質(zhì)量的經(jīng)驗(yàn)，應(yīng)請(qǐng)有條件的單位鑒定之。

②上法中標(biāo)本（血清）稀釋200倍是為了便于手工操作（加樣100μl），如有精密加樣器，可作20倍稀釋（用10μl）。為了適合不同實(shí)驗(yàn)室的條件（如不同類型的自動(dòng)化儀器），作適當(dāng)修改時(shí)應(yīng)注意抗原抗體的比例，必須十分注意反應(yīng)體系中不可有抗原過量，線性上限不可低于2.5g/L.換言之，抗血清用量必須充裕，否則標(biāo)本中apoA-Ⅰ高水平時(shí)測(cè)出結(jié)果偏低。目前國(guó)內(nèi)某些商品試劑盒不但抗血清效價(jià)過低，操作中所定標(biāo)本用量又過大（如3～5μl），抗體明顯不足，測(cè)出結(jié)果必然不準(zhǔn)確。

③為了達(dá)到準(zhǔn)確測(cè)定的目的，apoA-Ⅰ與B比濁測(cè)定（終點(diǎn)法）中必須作校準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。一定范圍（低標(biāo)本用量）濃度（X）與濁度（Y）基本上成直線關(guān)系，直線回歸計(jì)算出在Y軸上有一定截距（A值＜0.1），所以用單點(diǎn)校準(zhǔn)計(jì)算結(jié)果偏差較大，使測(cè)出結(jié)果不能準(zhǔn)確反映濃度的高低（高的偏低，低的偏高）。千萬不要因?yàn)閱吸c(diǎn)法簡(jiǎn)便而忽略了測(cè)定的準(zhǔn)確性。無論用何種自動(dòng)化儀器，必須先試作校準(zhǔn)曲線。如果在所用儀器及特定條件下反復(fù)測(cè)試，回歸線的截距不明顯時(shí)，才能采用單點(diǎn)校準(zhǔn)法。標(biāo)本用量在3～5μl時(shí)，即使加大抗血清用量，濃度與濁度也不成直線關(guān)系，只能用曲線直線化轉(zhuǎn)換后計(jì)算。

④主要干擾因素是血清本身的混濁（如高脂血清），用超離心或脂肪酶水解等標(biāo)本預(yù)處理方法都不實(shí)用。用表面活性劑消濁的作用也有限，所以在測(cè)定中必須作標(biāo)本空白管。除了自動(dòng)分析中可采用兩點(diǎn)法外，手工法用單一試劑而不扣除標(biāo)本空白的做法是錯(cuò)誤的。為了減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)濁度反應(yīng)的影響，必須用定值血清作校準(zhǔn)物。此外，塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。

⑤有的商品試劑盒（包括某些進(jìn)口產(chǎn)品）所附校準(zhǔn)血清定值不準(zhǔn)確，是誤差的重要來源。

（2）火箭電泳法：

①巴比妥緩沖液，離子強(qiáng)度0.05，pH8.6.

②10g/L瓊脂糖（標(biāo)準(zhǔn)電內(nèi)滲）用巴比妥緩沖液配制，加熱溶化，混合后，分裝10ml/管，冷后4℃貯存。

③0.15mol/L NaCl溶液。

④兔（或羊）抗人apoAⅠ抗血清（效價(jià)不低于1∶16）及apoB抗血清（效價(jià)不低于1∶32）。

⑤校準(zhǔn)血清（同比濁法）。

⑥染色液：考馬斯亮藍(lán)R-250 0.25g溶于甲醇45ml中，加入冰醋酸10ml及水45ml，混合，溶后備用。

⑦脫色液：每升含冰醋酸50ml及甘油100ml.