方法名稱：龜齡集－人參皂苷Rg1的測定－薄層掃描法

應用范圍：本方法采用薄層掃描法測定龜齡集中人參皂苷Rg1的含量。

本方法適用于中成藥龜齡集。

方法原理：

供試品經提取，過氧化鋁大孔樹脂柱，制成供試液，點樣、展開，用薄層掃描儀進行雙波長反射法鋸齒掃描，λS=541nm，λR=700nm測量人參皂苷Rg1吸收度積分值，計算其含量。

試劑：

1.氯仿

2.甲醇

3.鹽酸

4.硫酸

5.乙醇

6.人參皂苷Rg1 (中國藥品生物制品檢定所)

儀器設備：

1 儀器

1.1 薄層掃描儀

1.2 點樣器

一般采用微升毛細管或與之相應的點樣器材。

1.3 展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

1.4吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2 色譜條件

2.1薄層板

硅膠G薄層板0.5% CMC-Na板，105℃活化30min。

2.2展開劑

氯仿+甲醇+水=65+35+10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，4.2.3 顯色方式

噴以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑點顯色清晰。

2.4 掃描條件

雙波長反射法鋸齒掃描，λS=541nm，λR= 700nm；靈敏度：中；狹縫：0.4mm×0.4mm；線性化參數：SX=3。

試樣制備：

1. 對照品溶液的制備

精密稱取用五氧化二磷干燥至恒重的人參皂苷Rg1對照品10mg，置10mL量瓶中，用少量甲醇溶解后，加甲醇至刻度(1mg/mL)，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取本品20粒，精密稱定，傾出內容物，混勻，取約2 5g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚60mL，回流提取至近無色，棄去乙醚液，殘渣揮干乙醚，加甲醇70mL，回流提取至近無色，回收甲醇至干，殘渣用正丁醇飽和的水15mL溶解并移入分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次(15、15、15mL)，合并提取液，用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次(15、15、10mL)，再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水層，回收正丁醇至干，殘渣用70%乙醇適量溶解，移入已凈化處理的氧化鋁—D101型大孔樹脂柱[內徑1cm，D101型大孔樹脂高7cm(下層)；100～120目中性氧化鋁高3cm(上層)]上，再用70%乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，定量轉移至2mL量瓶內，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

操作步驟：1. 標準曲線的建立

精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6μL，分別點于同一以0.5%羧甲基纖維素鈉為粘合劑硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑展開，噴以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑點顯色清晰。用薄層掃描儀依法進行掃描， 以濃度為橫坐標，斑點面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程Y=773.3X 334.2，r=0.996；線性范圍為1.03～6.18μg。

2.供試品含量測定

精密吸取供試品溶液10μL，對照品溶液2μL與4μL，分別交叉點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑硅膠G薄層板上，依法展開，顯色，掃描測定，按外標二點法計算人參皂苷Rg1的含量。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

精密吸取對照品溶液4μL，在同一薄層板上點樣6次，依法展開，顯色，掃描測定，結果RSD為1.8%。