【摘要】目的：進(jìn)一步了解急性呼吸道感染中流感嗜血桿菌（HI）感染的發(fā)病情況。方法：采用單克隆抗體夾心酶聯(lián)免疫吸咐法，對36例上呼吸道感染、32例支氣管炎、70例肺炎患兒及45例健康對照組的血、尿進(jìn)行b型HI外膜蛋白（HiboMP）抗原的檢測，并對70例肺炎患兒的血清進(jìn)行HibOMP抗體檢測。結(jié)果36例上呼吸道感染患兒中有4例為HibOMP抗體陽性，32例支氣管肺炎患兒中有4例陽性，70例肺炎患兒中有18例為陽性；45例健康對照組中僅1例為HibOMP抗原陽性。肺炎組抗原檢出率高于對照組（c2=10.960，P〈0.01）。70例肺炎中18例HiboMP抗體陽性?？乖⒖贵w檢測共有24例（包括抗原、抗體均陽性12例，僅抗原或抗體陽性各6例）肺炎獲得陽性結(jié)果。結(jié)論11.1%的上呼吸道感染、12.5%支氣管炎和34.3%的肺炎患兒為Hib感染；抗原、抗體聯(lián)合檢測可使Hib檢出率提高。

　　流感嗜血桿菌（Hemophilusinfluenzae，HI）是急性呼吸道感染（ARI）中最常見的細(xì)菌病原之一。1984年報道HI在發(fā)展中國家小兒急性下呼吸道感染（ALRI）中分離率高達(dá)45%［1］，近年來，發(fā)展中國家報道HI所致的ARI并不少見［2，3］。國內(nèi)對ARI的細(xì)菌病原學(xué)研究相對薄弱，有關(guān)在ARI中HI感染的發(fā)病情況尚缺乏確切的流行病學(xué)資料。為此，我們進(jìn)行了ARI（包括上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎）中b型流感嗜血桿菌（Hib）致病情況的研究。

　　對象和方法

　　一、研究對象

　　依制訂的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，于1994年12月～1995年5月，在北京兒童醫(yī)院病房和門診選擇5歲以下（新生兒除外）、起病1周以內(nèi)的ARI患兒138例。其中，肺炎（包括6例毛細(xì)支氣管炎）70例，平均年齡1歲6月（2月～5歲）；支氣管炎32例，平均年齡為1歲10月（3個月～5歲）；上呼吸道感染36例，平均年齡為2歲（5個月～5歲）。138例患兒中男91例，女47例?；純航M取血前均用抗生素超過24小時。同時選擇45例5歲以下（新生兒除外）健康兒童為對照組，男24例，女21例，平均年齡為2歲（4個月～5歲）。

　　二、標(biāo)本的收集和處理

　　1.血：于入院當(dāng)時或門診初診時經(jīng)嚴(yán)格無菌操作抽取受檢者靜脈血3ml，放入含有30～50mlHI特殊培養(yǎng)基的瓶內(nèi)。并立即轉(zhuǎn)至CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)。同時取2ml靜脈血離心，留血清置-30℃冰箱內(nèi)保存待檢。出院時留第2份血清。第1份血清均取自發(fā)病3～7天（平均4天），第2份血清取自起病的2～3周。雙份血清間隔時間為7～14天（平均12天）。

　　2.咽分泌物：于入院當(dāng)時或門診初診時取受檢者咽后壁和兩側(cè)扁桃體區(qū)分泌物，放入含X、V因子的培養(yǎng)基肉湯中做咽分泌物培養(yǎng)［5］。標(biāo)本在1小時內(nèi)轉(zhuǎn)入CO2孵箱內(nèi)，增菌16～18小時，增菌液變混濁后轉(zhuǎn)種至培養(yǎng)皿。

　　3.尿：收集入院24小時內(nèi)或初診當(dāng)天的尿液30～50ml，置透析袋內(nèi)用聚乙二醇濃縮25～50倍，置-30℃冰箱保存待檢。

　　三、實(shí)驗(yàn)方法

　　1.細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定：用含有Levinthol原液的特殊HI培養(yǎng)基進(jìn)行咽分泌物、血細(xì)菌培養(yǎng)，對所得可疑的透明菌落進(jìn)一步分純，以衛(wèi)星試驗(yàn)及X、V因子需要試驗(yàn)來鑒定HI.進(jìn)一步血清分型采用Hib抗血清、a～f多價抗血清。若與Hib抗血清凝集者為Hib菌株。

　　2.Hib外膜蛋白（OMP）抗原檢測法：采用兩種單克隆抗體夾心的酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測HibOMP抗原。由于單克隆抗體P2-18可識別到目前為止所有的HI，且親和力較強(qiáng)［6］；P2-4僅可識別Hib菌株［7，8］。兩種針對不同抗原決定簇的單克隆抗體聯(lián)合應(yīng)用可提高檢測的敏感性。因此，選用P2-18作為包被抗體，P2-4作為酶標(biāo)抗體。對受檢者的血、尿進(jìn)行檢測。血或尿任一陽性即為Hib感染證據(jù)。

　　3.HibOMP抗體測定：采用Scarcosyl方法提取Hib菌的外膜蛋白，以國際標(biāo)準(zhǔn)株6880的OMP與臨床分離株C44的OMP進(jìn)行混合作為包被抗原，用間接ELISA法測定其特異性抗體IgG、IgM.以急性期血清抗體IgM水平高于同年齡±2s及雙份血清抗體3倍以上增高為產(chǎn)生抗體反應(yīng)的陽性標(biāo)準(zhǔn)?？乖蚩贵w反應(yīng)任一陽性即為Hib感染。

　　結(jié)果

　　一、Hib細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果

　　138例ARI患兒中無1例血培養(yǎng)分離出Hib，咽分泌物培養(yǎng)在對照組與患兒組之間Hib的分離率的差異無顯著意義（c2=1.039，P＞0.05）。

　　二、HibOMP抗原檢測結(jié)果

　　經(jīng)c2檢驗(yàn)，各組間HiboMP抗原檢出率的差異具非常顯著意義（c2=12.814，P〈0.01），兩兩比較，肺炎組與對照組的HibOMP抗原檢出率的差異具有顯著意義（c2=10.960，P〈0.01）。

　　三、HibOMP抗體測定的結(jié)果

　　70例肺炎患兒中有19例測出了HibOMP抗體，除1例查出非b型的HI抗原系交叉反應(yīng)所致外，余18例（25.7%）可確證為Hib感染，其中12例同時檢出HiboMP抗原，6例未查到HibOMP抗原。

　　結(jié)合抗原、抗體測定的結(jié)果，24例肺炎患兒確定了Hib感染的診斷（34.3%，包括抗原、抗體共同陽性12例，僅HibOMP抗原和HibOMP特異抗體反應(yīng)陽性各6例）。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

　　討論

　　HI和肺炎鏈球菌既是呼吸道的正常菌群，又是ARI的最常見的致病菌。因而，咽分泌物培養(yǎng)不能代表下呼吸道感染的致病菌。痰標(biāo)本在5歲以內(nèi)小兒又不易獲得。血培養(yǎng)特異性強(qiáng)，敏感性差，ARI時很難得到陽性的血培養(yǎng)結(jié)果。本組138例ARI中無1例血培養(yǎng)分離出HI，可能與取血前受檢者均用過抗生素致細(xì)菌死亡有關(guān)。細(xì)菌抗原檢測為ARI的細(xì)菌病原學(xué)診斷提供了新的途徑。與血培養(yǎng)相比其敏感性較高。單克隆抗體使其特異性大大提高［9］。我們應(yīng)用兩種識別不同抗原位點(diǎn)的單克隆抗體建立了雙抗體夾心的ELISA方法，其檢測各種ARI中HibOMP抗原的檢出率依次為：上呼吸道感染為11.1%，支氣管炎為12.5%，肺炎25.7%，以肺炎的為最高。而健康對照組僅2.2%.表明Hib感染在小兒肺炎中占重要地位。

　　如果抗原、抗體聯(lián)合檢測，70例肺炎患兒中24例（34.3%）體內(nèi)存在Hib感染的證據(jù)，因此，聯(lián)合抗原、抗體測定可進(jìn)一步提高呼吸道感染患兒中Hib感染的檢出率。

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