【摘要】為評價流式細胞計數(shù)法和Nageotte血細胞計數(shù)法計數(shù)單采血小板中殘留白細胞，應用系列的稀釋實驗研究其準確性；對已知白細胞濃度的同一樣本，反復檢測14次，研究其重復性；分別用流式細胞計數(shù)法和Nageotte血細胞計數(shù)法檢測102份去白細胞的單采血小板樣本，對其結(jié)果進行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當白細胞濃度為0.8＜WBC/μl＜10時，兩方法無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論：兩種方法均可用于少白細胞成分的質(zhì)量控制。

　　【關(guān)鍵詞】血小板單采

　　近年來，大力提倡和開展成分獻（輸）血，尤其是單采血小板。近代醫(yī)學研究表明，血液中非治療性成分如白細胞等是一種“污染物”，去除單采血小板樣品中白細胞的污染不僅可以降低非溶血性輸血反應［1］、巨細胞病毒等嗜白細胞病毒的傳播［2］，還可以減少HLA同種異體免疫反應［3］（血小板輸注無效、移植物抗宿主病等）。國際上，已將引起HLA同種異體免疫反應的白細胞污染量控制在5×106以下［4］。這已遠遠超出了現(xiàn)有傳統(tǒng)計數(shù)方法的檢測限。近幾年，已經(jīng)報道了很多種低濃度白細胞的計數(shù)方法［5］，其中Nageotte血細胞計數(shù)法和流式細胞計數(shù)法應用最廣［6-8］。我們對這兩種低濃度白細胞污染的計數(shù)方法進行了應用和評價?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

　　材料和方法

　　儀器與試劑　流式細胞計數(shù)：FACSCalibur流式細胞儀（BDIS產(chǎn)品）、LeucoCOUNT試劑（BDIS產(chǎn)品）和TruCOUNT磁珠管（BDIS產(chǎn)品）。Nageotte計數(shù)盤（HausserScientificHorsham，USA產(chǎn)品）。血小板單采機：MCS+Haemonetics與Spectra，COBELaboratories.白細胞定值樣本：由浙江大學醫(yī)學院與浙江省人民醫(yī)院提供。

　　樣本收集　浙江省血液中心無償獻血者去白細胞單采血小板，共102份，留樣后24小時內(nèi)檢測。

　　流式細胞計數(shù)　將100μl樣品加入到已知數(shù)量的TruCOUNT磁珠管中，再加入400μl試劑，輕搖，室溫暗置30分鐘，混勻后計數(shù)1.0×104磁珠中PI染色的白細胞數(shù)。利用以下公式計算白細胞濃度：WBC/μl=（白細胞數(shù)/104）×TruCOUNT總磁珠數(shù)/樣品體積（100μl）醫(yī)學教育網(wǎng)搜集整理

　　Nageotte血細胞計數(shù)　樣品5倍稀釋，充池后加蓋靜置30分鐘，普通光學顯微鏡計數(shù)1個大方格（50μl）內(nèi)白細胞總數(shù)（n）。利用以下公式計算白細胞濃度：WBC/μl=（n/50）×5=n/10

　　統(tǒng)計學分析　實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差（X±D）表示，統(tǒng)計處理采用MicrosoftExcel軟件，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。

　　結(jié)果

　　準確性評價　已知白細胞濃度的樣品通過1/10系列稀釋（0.1-10.0WBC/μl），每份標本分別用流式細胞計數(shù)法（A）和Nageotte血細胞計數(shù)法（B）平行檢測。將測定值與預期值配對回歸分析，得到相關(guān)系數(shù)（r）、斜率和截距。當0.1＜WBC/μl＜0.7時，流式細胞計數(shù)法的測定值和預期值呈直線相關(guān)，y=0.99x+0.01，r=0.99（P＜0.001），Nageotte血細胞計數(shù)法測定值比預期值持續(xù)偏低，y=1.07x-0.21，相關(guān)性差，r=0.90；當0.8＜WBC/μl＜10.0時，兩方法的直線回歸分別為A：y=1.01x-0.02，B：y=0.99x-0.07，測定值和預期值呈直線相關(guān)r=0.99（P＜0.001），準確性高。

　　重復性評價　白細胞濃度為4.0/μl的同一樣本，分別用兩種方法重復檢測14次，流式細胞計數(shù)法白細胞均值為4.07/μl，95%可信區(qū)間為3.51-4.63/μl；Nageotte血細胞計數(shù)法白細胞均值為3.91/μl，95%可信區(qū)間為3.27-4.55/μl。兩方法的14次檢測結(jié)果均在95%可信區(qū)間內(nèi)，重復性高（CV＜10%）結(jié)果見表1。Table 1. Interassay coefficient of variation for 14 replications of a sample with a mean leukocyte concentration of 4/μl（略）　　

　　應用性評價　分別用兩種方法同時檢測102份去除白細胞的單采血小板樣品，流式細胞計數(shù)法檢測白細胞均值為1.12/μl；Nageotte血細胞計數(shù)法檢測白細胞均值為1.10/μl，所有檢測結(jié)果均在95%可信區(qū)間內(nèi)。經(jīng)統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)兩方法無顯著差異（P>0.05），結(jié)果見表2.Table 2. Comparison of results obtained by　flow cytometry and Nageotte method （略）醫(yī)學教育網(wǎng)搜集整理

　　討論

　　由于白細胞去除技術(shù)的不斷發(fā)展，低濃度白細胞檢測也面臨更新的挑戰(zhàn)，傳統(tǒng)的全自動血細胞計數(shù)儀檢測精度＞100/μl［9，10］；Neubauer計數(shù)池精度為2.8-5.6/μl；Nageotte計數(shù)池與流式儀的精度均可達到0.05-0.1/μl，當白細胞數(shù)<0.8/μl，Nageotte血細胞計數(shù)法和流式細胞計數(shù)法一樣，其測定值和預期值呈直線相關(guān)，準確度高、重復性好（CV＜10%），檢測102份樣本，兩者并無顯著差異。基于以上結(jié)果，本研究肯定了Nageotte血細胞計數(shù)法和流式細胞計數(shù)法在相應檢測限內(nèi)高度的準確性和可重復性。Wenz［10］與Kao等［11］也發(fā)現(xiàn)，Nageotte血細胞計數(shù)明顯比傳統(tǒng)方法準確可靠，與流式細胞計數(shù)相比，具有不需要特殊的儀器和試劑、簡單、快速、經(jīng)濟等優(yōu)點，適合于血站系統(tǒng)血液成分白細胞污染的常規(guī)質(zhì)量控制［12］。

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