感受態(tài)是指細(xì)菌處于容易吸收外源DNA的狀態(tài)。轉(zhuǎn)化是指質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組子導(dǎo)人細(xì)菌的過程。其原理是細(xì)菌處于0℃，CaCl2低滲溶液中，菌細(xì)胞膨脹成球形。轉(zhuǎn)化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基—鈣磷酸復(fù)合物粘附于細(xì)胞表面，經(jīng)42℃短時(shí)間熱擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。將細(xì)菌放置在非選擇性培養(yǎng)基中保溫一段時(shí)間，促使在轉(zhuǎn)化過程中獲得的新的表型（如Ampr等）得到表達(dá)，然后將此細(xì)菌培養(yǎng)物涂在含有氨芐青霉素的選擇性培養(yǎng)基上。

　　重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞后，還需對轉(zhuǎn)化菌落進(jìn)行篩選鑒定。利用α互補(bǔ)現(xiàn)象進(jìn)行篩選是最常用的一種鑒定方法?，F(xiàn)在使用的許多載體都具有一段大腸桿菌β半乳糖苷酶的啟動(dòng)子及其編碼α肽鏈的DNA序列，此結(jié)構(gòu)稱為lacZ'基因。lacZ'基因編碼的α肽鏈?zhǔn)?beta;半乳糖苷酶的氨基端的短片段（146個(gè)氨基酸）。任何攜帶著lacZ'基因的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化了染色體基因組存在著此種β半乳糖苷酶突變的大腸桿菌細(xì)胞后，便會(huì)產(chǎn)生出有功能活性的半乳糖苷酶，在IPTG（異丙基β—D—硫代半乳糖苷）誘導(dǎo)后，在含有Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-6-D-半乳糖苷）的培養(yǎng)基平板上形成藍(lán)色菌落（半乳糖苷酶能將無色的化合物Xgal切割成半乳糖和深藍(lán)色的底物5-溴-4-靛藍(lán)）。而當(dāng)有外源DNA片段插入到位于lacZ'中的多克隆位點(diǎn)后，就會(huì)破壞α肽鏈的閱讀框，從而不能合成與受體菌內(nèi)突變的β半乳糖苷酶相互補(bǔ)的活性α肽，而導(dǎo)致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶，也就不能分解Xgal而顯藍(lán)色，因此含有重組質(zhì)粒載體的克隆往往是白色菌落醫(yī)學(xué)`教育網(wǎng)搜集整理。