ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一種廣泛應(yīng)用于臨床和科研領(lǐng)域的高靈敏度、特異性的免疫學(xué)檢測(cè)方法。其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)來(lái)檢測(cè)樣本中的目標(biāo)分子。

ELISA試驗(yàn)通常包括以下幾個(gè)步驟：
1. 包被：首先，將已知的抗原或抗體固定在固相載體（如微孔板）上，這個(gè)過(guò)程稱為包被。不同的ELISA類型會(huì)使用不同的物質(zhì)進(jìn)行包被，例如直接法和間接法則分別以抗原和特異性抗體作為包被物。
2. 封閉：為了減少非特異性結(jié)合對(duì)結(jié)果的影響，在包被完成后需要加入含有高濃度無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)的溶液（如牛血清白蛋白）來(lái)覆蓋未與目標(biāo)分子結(jié)合的位點(diǎn)，這一過(guò)程稱為封閉。
3. 加樣：將待測(cè)樣本加入到已經(jīng)經(jīng)過(guò)包被和封閉處理的微孔板中。如果樣本中含有相應(yīng)的抗原或抗體，則會(huì)發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。
4. 洗滌：通過(guò)多次洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)，留下與固相載體上包被物發(fā)生特異性結(jié)合的目標(biāo)分子。
5. 酶標(biāo)二抗孵育：加入帶有酶標(biāo)記的第二抗體（即酶標(biāo)二抗）。此步驟中，酶標(biāo)二抗會(huì)與樣本中的目標(biāo)抗體或抗原形成復(fù)合體。不同類型的ELISA試驗(yàn)在此步使用的酶標(biāo)物質(zhì)可能有所不同。
6. 顯色反應(yīng)：最后一步是向微孔板中加入底物溶液，如果存在酶標(biāo)記的復(fù)合體，則會(huì)發(fā)生顏色變化。這種顏色的變化可以通過(guò)分光光度計(jì)等設(shè)備測(cè)量吸光度值來(lái)定量分析目標(biāo)分子的濃度。

ELISA試驗(yàn)因其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，在臨床診斷、疾病篩查以及科學(xué)研究中得到了廣泛應(yīng)用。