發(fā)光劑的標記技術總結
發(fā)光劑的標記技術總結,跟著小編來學習一下吧!
(一)常用標記方法 小分子物質(zhì)(如藥物、激素等)的標記主要是通過偶聯(lián)反應制備(直接偶聯(lián));生物大分子的標記是利用交聯(lián)劑使標記物與被標記物分子結構中游離的氨基、硫氫基、羥基等基團形成不可逆的連接(間接偶聯(lián))。
常見有:碳二亞胺縮合法;過碘酸鈉氧化法;重氮鹽偶聯(lián)法;N-羥基琥珀酰亞胺活化法。
(二)影響標記的因素
1.發(fā)光劑的選擇。
2.被標記蛋白質(zhì)的性質(zhì):選用較高的純度和免疫學穩(wěn)定性的抗原進行標記;抗體作為被標記物時,則要求具有較高的效價,應用提純的IgG來代替全血清。
3.選擇正確的標記方法。
4.原料比:IgG:發(fā)光劑:交聯(lián)劑的克分子比(mol: 第十一章 生物素-親和素放大技術mol:mol)會影響結合物的發(fā)光效率。
5.標記率:結合物中IgG與發(fā)光劑之間的克分子比。
6.溫度:盡量選擇較低的溫度,以避免蛋白質(zhì)在標記過程中活性的喪失。
7.純化與保存:通過透析法、凝膠過濾法和鹽析沉淀法等進行純化。結合物一般可分裝保存在-70℃條件下,最好冷凍干燥保存。
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