
免疫學(xué)檢測中,何為ELISA法?
ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)即酶聯(lián)免疫吸附試驗,是一種常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)。其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)來定性或定量地檢測樣本中的特定物質(zhì),如蛋白質(zhì)、激素、病毒抗原等。
ELISA法主要包括以下幾個步驟:
1. 包被:將待測的抗原或者已知的抗體固定在固相載體(通常是微孔板)上。
2. 封閉:使用無關(guān)蛋白(例如牛血清白蛋白BSA)覆蓋未結(jié)合位點,以減少非特異性吸附。
3. 加樣:向包被好的微孔中加入待測樣品,如果樣品中含有目標(biāo)抗原或抗體,則會與固定的成分發(fā)生免疫反應(yīng)形成復(fù)合物。
4. 洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì)。
5. 酶標(biāo)二抗孵育:加入針對特定物種IgG的酶標(biāo)記抗體(如辣根過氧化物酶HRP),該酶標(biāo)二抗能特異性地識別并結(jié)合到第一步形成的免疫復(fù)合物上。
6. 洗滌:再次洗滌以除去未反應(yīng)的酶標(biāo)二抗。
7. 顯色:加入底物,如果存在酶標(biāo)記抗體,則會發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化,通過測定吸光度值來判斷樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
ELISA法具有操作簡便、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點,在臨床診斷和科學(xué)研究中有廣泛的應(yīng)用。
ELISA法主要包括以下幾個步驟:
1. 包被:將待測的抗原或者已知的抗體固定在固相載體(通常是微孔板)上。
2. 封閉:使用無關(guān)蛋白(例如牛血清白蛋白BSA)覆蓋未結(jié)合位點,以減少非特異性吸附。
3. 加樣:向包被好的微孔中加入待測樣品,如果樣品中含有目標(biāo)抗原或抗體,則會與固定的成分發(fā)生免疫反應(yīng)形成復(fù)合物。
4. 洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì)。
5. 酶標(biāo)二抗孵育:加入針對特定物種IgG的酶標(biāo)記抗體(如辣根過氧化物酶HRP),該酶標(biāo)二抗能特異性地識別并結(jié)合到第一步形成的免疫復(fù)合物上。
6. 洗滌:再次洗滌以除去未反應(yīng)的酶標(biāo)二抗。
7. 顯色:加入底物,如果存在酶標(biāo)記抗體,則會發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化,通過測定吸光度值來判斷樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
ELISA法具有操作簡便、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點,在臨床診斷和科學(xué)研究中有廣泛的應(yīng)用。
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