【摘要】目的：探討檢測惡性胸腔積液（MPE）患者外周血（PB）和胸水（PE）中T淋巴細(xì)胞亞群（TLS）的意義及化療前后TLS的變化。方法：對比良性胸腔積液（BPE）、MPE患者外周血和胸水及健康正常人外周血中TLS的水平；對比MPE患者外周血和胸水中TLS的水平；對比MPE患者化療前、后外周血和胸水中TLS的水平。結(jié)果：TLS在胸腔積液患者外周血和胸水中分布相似；MPE患者外周血中CD8+T細(xì)胞水平高于正常人（30.6±2.4vs20.9±1.8，P<0.05），CD4+T細(xì)胞相仿，CD4+/CD8+低于正常（1.78±0.21vs2.71±0.35，P<0.05）；與BPE患者相比，MPE患者外周血和胸水中CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+較低（P<0.05），而CD8+T細(xì)胞較高（P<0.05）；化療后MPE患者外周血和胸水中CD8+T細(xì)胞水平明顯降低（30.6±2.4vs24.7±2.3，31.6±2.4vs21.9±4.1，P<0.05），CD4+/CD8+明顯升高（1.78±0.21vs2.19±0.19，1.69±0.30vs2.62±0.40，P<0.05）。結(jié)論：檢測外周血可以了解胸水中TLS水平；檢測外周血和胸水中TLS水平有助于BPE和MPE的鑒別；化療可部分改善MPE患者的細(xì)胞免疫抑制狀態(tài)。

　　【關(guān)鍵詞】胸腔積液；T淋巴細(xì)胞；CD4；CD8

　　引言

　　腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞免疫功能降低密切相關(guān)，T淋巴細(xì)胞在其中起中心調(diào)控作用［1］。為比較良性胸腔積液（benignpleuraleffusion，BPE）和惡性胸腔積液（malignantpleuraleffusion，MPE）患者的T淋巴細(xì)胞亞群（TLS）分布水平及對原發(fā)病的診斷價值，和化療對其影響，我們選擇BPE，MPE患者的胸腔積液和外周血及正常健康人外周血進(jìn)行TLS檢測。

　　1.對象和方法

　　1.1　對象診斷明確MPE32（男21，女11）例，平均年齡57.9歲，鱗腺癌4例，腺癌28例；BPE（結(jié)核性）29（男17，女12）例，平均年齡45.7歲；正常對照組選自體檢合格、肝、腎、肺功能完全正常健康人27（男14，女13）例，平均年齡34.2歲?；颊哂谥委熐靶行厍淮┐绦g(shù)，收集胸腔積液，同時抽取靜脈血10mL.MP患者經(jīng)NP方案化療2個周期后（蓋諾25mg/m2ivd1，d8；DDP40～50mgd1～3，21d為一周期），收集胸腔積液，同時抽取靜脈血10mL.采集體檢正常健康人靜脈血10mL.

　　1.2　方法胸腔積液用200μm尼龍網(wǎng)過濾組織于離心管；加入5mLRPMI；18℃，200g離心10min，去除上清液，混懸細(xì)胞沉淀于20mLRPMI，重復(fù)離心1次，重混懸細(xì)胞沉淀于5mLRPMI，加入PBS沖洗細(xì)胞，室溫下，200g離心10min，去除上清液。重復(fù)此步驟。混懸細(xì)胞沉淀于適量RPMI備用。用臺盼藍(lán)計數(shù)活細(xì)胞百分率。將肝素化的新鮮去紅細(xì)胞混懸液室溫下加入等量PBS混勻，每10mL去紅細(xì)胞混懸液/PBS混懸液中加入3mLFicollHypaque液。18℃，900g，離心30min.移除上層的血漿和血小板，緩慢的轉(zhuǎn)移中層的單個核細(xì)胞層到錐形管，用3倍體積的HBSS洗滌細(xì)胞，18℃，490g，離心10min.去除上清液。用HBSS重新混勻細(xì)胞、洗滌并離心1次，去除上清液?；鞈壹?xì)胞于RPMI備用。用臺盼藍(lán)計數(shù)活細(xì)胞百分率。計數(shù)外周血和胸腔積液淋巴細(xì)胞，用RPMI調(diào)整細(xì)胞度至2.5×109/L，將l06淋巴細(xì)胞懸于100μLHanks緩沖液（含1g/L牛血清蛋白、0.1g/L疊氮鈉）中，分別與20μL抗CD3APC（UCHT1）、抗CD4FITC（RPAT4）及抗CD8Cychrome（RPAT8）mAb或相應(yīng)IgG對照蛋白（均購自美國BDPharmingen公司）于4℃孵化30min，Hanks緩沖液洗滌2次，5g/L多聚甲醛固定。24h內(nèi)用FACStarPlus流式細(xì)胞儀檢測CD3，CD4，CD8細(xì)胞，計算CD4/CD8比值。

　　統(tǒng)計學(xué)處理：用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以x±sx表示。組間比較用MannWhitneyU檢驗。組內(nèi)前后比較用Wilcoxon signedrank檢驗。

　　2.結(jié)果

　　2.1　T細(xì)胞亞群的差異MPE患者外周血（PB）CD3+，CD8+T細(xì)胞高于正常人對照組（P<0.05），CD4+T細(xì)胞相仿（P>0.05），CD4+/CD8+低于正常人對照組（P<0.05）；BPE患者PBCD3+，CD4+，CD8+均高于正常人對照組（P<0.05），CD4+/CD8+相仿（P>0.05）。BPE，MPE患者PBCD3+T細(xì)胞相仿（P>0.05），前者CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T細(xì)胞低于后者（P<0.05）。BPE，MPE中CD3+T細(xì)胞相仿（P<0.05），前者CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T細(xì)胞低于后者（P<0.05）?；颊咄庵苎蚉E中TLS分布相似（P>0.05）（表1）。

　　2.2　化療后TLS的變化MPE患者化療前、后PB和PE中CD3+，CD4+T細(xì)胞無明顯變化（P>0.05），而CD8+T細(xì)胞明顯降低，CD4+/CD8+明顯升高（P<0.05，表2）。表1胸腔積液患者/正常人T細(xì)胞亞群（略）表2惡性胸腔積液患者化療后T細(xì)胞亞群變化變化（略）醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

　　3.討論

　　MPE患者外周血CD3+，CD8+T細(xì)胞百分率明顯高于健康人，CD4+細(xì)胞無明顯差異，CD4+/CD8+比值明顯低于健康人。提示MPECD4+/CD8+比值降低是由于CD8+細(xì)胞增高所導(dǎo)致，反映了MPE患者的細(xì)胞免疫功能處于抑制狀態(tài)。而BPECD3+，CD4+，CD8+T細(xì)胞百分率均高于健康人，CD4+/CD8+比值無明顯差異，反映了BPE患者的細(xì)胞免疫功能處于激活狀態(tài)。在外周血和胸腔積液中，兩者的CD3+T細(xì)胞百分率相似，但MPE患者的CD4+T細(xì)胞百分率、CD4+/CD8+比值低于BPE患者，CD8+T細(xì)胞百分率高于BPE患者。提示檢測外周血或胸腔積液中TLS，有助于臨床上對BPE，MPE患者的鑒別診斷。MPE患者的外周血和胸腔積液中CD3+，CD4+，CD8+TLS百分率和CD4+/CD8+比值均相似，說明胸腔積液和外周血的分布水平非常接近，T細(xì)胞釋放到外周血和分配到胸膜腔的水平有關(guān)，通過外周血TLS的檢測可反映出胸腔積液T淋巴細(xì)胞水平?；熀驝D8+T細(xì)胞明顯降低，CD4+/CD8+明顯升高，而CD3+，CD4+T細(xì)胞無明顯變化。提示常規(guī)化療后腫瘤細(xì)胞大量壞死或凋亡，腫瘤負(fù)荷減少而使免疫抑制因子減少，可部分改善患者的細(xì)胞免疫抑制狀態(tài)，但細(xì)胞免疫功能紊亂并未得到完全糾正。

　　CD4+T細(xì)胞（Th）可分泌IL2，TIFN等細(xì)胞因子，并誘導(dǎo)或促進(jìn)自然殺傷（NK）細(xì)胞等多種細(xì)胞毒性細(xì)胞的活性，共同發(fā)揮抗腫瘤作用［2］。CD8+T細(xì)胞（Ts）則抑制機體的免疫功能，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。惡性胸腔積液患者腫瘤細(xì)胞負(fù)荷增加，分泌免疫抑制因子增多，在抑制T淋巴細(xì)胞增殖、分化過程中造成Ts，Th細(xì)胞水平的增、減，以有利于腫瘤在宿主的轉(zhuǎn)移［3］。因此，細(xì)胞比值是反映細(xì)胞免疫平衡狀態(tài)的敏感性指標(biāo)，本研究結(jié)果提示惡性胸腔積液患者存在明顯的細(xì)胞免疫功能低下、紊亂；T淋巴細(xì)胞亞群的測定對惡性胸腔積液的診斷及療效評估有一定價值；外周血中T淋巴細(xì)胞的檢測可以反映胸腔積液中T淋巴細(xì)胞分布水平。并提示在有效化療殺傷癌細(xì)胞的同時，應(yīng)輔助以免疫調(diào)節(jié)治療，從而提高患者的細(xì)胞免疫功能，更有利于延長患者的生存期并改善其生存質(zhì)量［4-5］。

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