1）  染色體顯帶

　　顯Q帶法

　　1.漂洗：取經(jīng)過干熱預(yù)處理或已老化的染色體標(biāo)本，置于pH6.0緩沖液中浸5~10分鐘。

　　2.染色：浸入pH6.0的GM或QD染液中5~10分鐘。

　　3.漂洗：浸入新鮮pH6.0緩沖液中漂洗兩次，每次5分鐘。

　　4.觀察：向標(biāo)本染色體面滴1~2滴新鮮緩沖液，覆以蓋片（避免出氣泡），置熒光顯微鏡下觀察。

　　顯G帶法

　　胰酶-Giemsa混合顯帶法

　　1.預(yù)處理：取中期染色體標(biāo)本，置60℃～60℃溫箱中20～30分鐘，或在37℃溫箱過夜，然后浸入0.025M磷酸緩沖液中，pH6.8，56℃溫浴10分鐘。

　　2.消化和染色：用現(xiàn)配制的胰蛋白酶-Giemsa混合液消化和染色10～30分鐘，混合液按如下比例配制：

　　0.025 M 磷酸緩沖液pH6.8           73.0 ml

　　甲醇                                 27.0 ml

　　Giemsa干粉                          50.0 mg

　　0.25%胰酶                           0.3～0.4 ml

　　3.封片：染色后用自來水沖洗，入蒸餾水漂洗數(shù)次、晾干、二甲苯透明2~3分鐘，封入中性樹脂中。

　　Giemsa顯帶法

　　1.預(yù)處理：將標(biāo)本置入60~80℃溫箱或烤箱中20~30分鐘，亦可在37℃溫箱過夜。

　　2.胰酶消化：用0.85%的NaCl配制0.25%胰蛋白酶溶液消化3~5分鐘。

　　3.染色：取出標(biāo)本片，先直立于吸水紙上除去多余胰酶液后，隨即置入Giemsa染液中，染10分鐘。

　　4.封片：自來水洗，蒸餾水漂洗，晾干，二甲苯透明2~3分鐘，封入中性樹膠中。

　　2）  姐妹染色單體分化染色

　　BUdR摻入和制片程序

　　1.BUdR培養(yǎng)液制備：先制備好含BUdR的培養(yǎng)液（最終濃度為3~10微克/毫升）。

　　2.BUdR摻入：如用傳代細(xì)胞，在末次傳代后，改換用含BUdR的培養(yǎng)液培養(yǎng)。如為人末梢血細(xì)胞，一開始就用含BUdR培養(yǎng)液培養(yǎng)（培養(yǎng)瓶放在特制黑色木盒、黑布中或黑紙包裹）37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

　　3.中止摻入與制片：待細(xì)胞經(jīng)歷兩個(gè)細(xì)胞周期（人周圍血細(xì)胞培養(yǎng)48或72小時(shí)）

　　4.加秋水仙素—制片。

　　姐妹染色單體分化染色

　　方法一

　　1.老化：中期染色體標(biāo)本老化1~2天。

　　2.預(yù)處理：放入預(yù)熱至85~89℃的1 M NaH2PO4處理15分鐘。

　　3.制片：然后用溫蒸餾水輕輕漂洗，蒸餾水沖洗，晾干，Giemsa液染色10分鐘，晾干，二甲苯透明，封固。

　　方法二：即FPG法

　　1.標(biāo)本：摻入BUdR后的中期染色體標(biāo)本。

　　2.熒光染色：用熒光染料Hoechst 33258（用pH7.0 Sorensen緩沖液配制，濃度為0.5微克/毫升）染色12~15分鐘。

　　3.黑光燈照射：自來水沖洗，加1滴pH8.0 緩沖液，覆以蓋片，用黑光燈照射（20 W），距離5厘米，時(shí)間半小時(shí)。

　　4.溫?。?0~60℃熱的2×SSC液溫育2小時(shí)，蒸餾水沖洗，晾干。

　　5.染色：pH6.8的2%Giemsa染色15分鐘，透明封固。

　　方法三

　　1.標(biāo)本：摻入BUdR后的中期染色體標(biāo)本，置30瓦日光燈下，燈距3厘米，照射6小時(shí)。

　　2.溫浴：用2×SSC液（60℃）處理15分鐘。

　　3.Giemsa染色10分鐘，也可獲得滿意的標(biāo)本。

　　3）  染色體脆性位點(diǎn)的檢測(cè)

　　為提高檢出率，可采取以下措施：

　　1.在培養(yǎng)時(shí)把血清量降到5%.

　　2.用不含葉酸的MEM-Fra培養(yǎng)基培養(yǎng)。

　　3.PH調(diào)至7.5.

　　4）  微核檢測(cè)

　　方法一：

　　1.采血：靜脈采血0.5ml，肝素抗凝，用小方瓶培養(yǎng)，加培養(yǎng)液5ml.培養(yǎng)液租成為：含20%小牛血清的Eagle液，加PHA 40微克/毫升。

　　2.培養(yǎng)：置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48或72小時(shí)，以1000rpm離心8分鐘。

　　3.固定：3：1甲醇/冰醋酸固定3次，每次15分鐘，離心沉淀固定液。

　　4.制片：冷凍載片滴片法制片，自然干燥，10%Giemsa（pH6.8）染色15分鐘。

　　方法二

　　1.采血：肝素抗凝血0.5~0.6ml，置10ml試管中，加入血量一半的0.5%甲基纖維素，充分混合。

　　2.培養(yǎng)：置37℃溫箱中靜置培養(yǎng)30分鐘，以2000rpm離心10分鐘，去上清液。

　　3.制片：做涂片，Wright法染色。

　　方法三

　　1.采血：用三棱針刺無名指取血0.6ml，立即注入內(nèi)徑3mm，長5cm的血液沉淀管中，用小玻璃棒攪拌除去纖維蛋白。

　　2.加明膠：加入3%的明膠，小心混勻，置37℃溫箱自然沉降50分鐘。

　　3.吸去上清液，離心，沉淀物涂片，自然干燥，Wright染色30分鐘，再用Giemsa染色2分鐘。

　　5）  非程序DNA合成檢測(cè)（UDS）

　　放射自顯影UDS的測(cè)定：

　　1.細(xì)胞培養(yǎng)：WI-38成纖維細(xì)胞，完全培養(yǎng)液支持物蓋片培養(yǎng)法培養(yǎng)，細(xì)胞生長至匯合時(shí)。

　　2.抑制DNA合成：棄舊培養(yǎng)液，加入不含精氨酸的EMEM培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)20~24小時(shí)。

　　3.加測(cè)試物：加入10mM羥基脲（陽性對(duì)照加MNNG），培養(yǎng)2小時(shí)。

　　4.H-TdR處理：2、3、4每皿內(nèi)加3H-TdR后，培養(yǎng)20~24小時(shí)。

　　5.漂洗：去除培養(yǎng)液，用不含鈣、鎂BSS漂洗。

　　6.制片：制備放射自顯影標(biāo)本方法固定細(xì)胞、涂膠、曝光、顯影及染色。

　　7.觀察：在油鏡下計(jì)數(shù)，首先要排除S期半保留復(fù)制細(xì)胞（為銀粒覆蓋的細(xì)胞核），只計(jì)數(shù)核上的銀粒數(shù)目，再扣除本底，結(jié)果以銀粒數(shù)/核的均值或含10個(gè)銀粒左右細(xì)胞的百分率表示。

　　液閃計(jì)數(shù)法：

　　1.細(xì)胞培養(yǎng)和處理：人二倍體成纖維細(xì)胞：接種在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。

　　2.加培養(yǎng)液、MNNG、羥基脲，以及3H-TdR處理等于前5項(xiàng)相同。自（5）漂洗后。

　　3.消化：用0.25%胰蛋白酶消化，制成懸液。

　　4.液閃計(jì)數(shù)標(biāo)本制備：10%三氯醋酸處理，將細(xì)胞收集在玻璃纖維濾紙片上，無水乙醇脫水烤干，置液閃杯中，加閃爍液，置液閃計(jì)數(shù)儀上計(jì)數(shù)。結(jié)果以dpm/106細(xì)胞或cpm/每皿細(xì)胞表示。